铜绿微囊藻生物钟蛋白的表达纯化与抗体制备

• 作者: 徐虹 杨秀娜 王立红 章军 罗志勇
• 来源期刊: 高技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 铜绿微囊藻 生物钟蛋白 多克隆抗体 酶联免疫吸附 免疫印迹
• 年，卷（期）: 2006,（7）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 725-729
• 页数: 5页
• 分类号: Q81
• 字数: 4733字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1002-0470.2006.07.013

摘要

为了获得融合表达的铜绿微囊藻(Microcystic aeruginosa)生物钟蛋白KaiA、KaiB、KaiC并制备其相应的多克隆抗体,将kaiA、kaiB、kaiC基因分别克隆到原核表达质粒pET-His中.重组质粒pET-His-KaiA,pET-His-KaiB和pET-His-KaiC经酶切和测序鉴定后,分别转化E.coli BL21(DE3)进行融合表达.经SDS-PAGE分析可知,融合表达的KaiA、KaiB和KaiC蛋白表达量可分别达到菌体总蛋白的25%、40%和20%.经亲和层析后融合蛋白KaiA和KaiB的纯度分别达95%和92%,而KaiC经胶回收纯化后纯度也可达93%.将纯化后的三种Kai蛋白作为抗原分别免疫小鼠制备多克隆抗体,经ELISA检测抗体滴度表明,制备的抗KaiA、抗KaiB和抗KaiC的多克隆抗体效价高,分别可达到1:50000、1:60000和1:100000.Western blotting结果表明:获得的多克隆抗体具有较高的效价,抗体能识别相应的Kai蛋白,具有较高的特异性,能用于铜绿微囊藻生物钟蛋白KaiA、KaiB和KaiC的表达节律检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐虹	厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室	32	245	10.0	14.0
2	章军	厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室	35	265	10.0	14.0
3	罗志勇	厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室	1	2	1.0	1.0
4	杨秀娜	厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室	2	27	2.0	2.0
5	王立红	厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室	3	18	2.0	3.0