鼠源性人乳腺癌单链抗体库的构建与乳腺癌相关抗体的筛选

• 作者: 胡宝成 袁翔
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 单链抗体库 噬菌体展示 乳腺癌 筛选
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11|Q78
• 字数: 4235字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2006.01.001

摘要

目的:获得乳腺癌的噬菌体呈现型单链抗体(scFv)库,筛选与乳腺癌细胞特异结合的抗体,为乳腺癌的诊断和治疗奠定基础.方法:用乳腺癌细胞系MCF-7、T47D、MDA-MB-435免疫BALB/c小鼠,取脾脏提取总RNA,用RT-PCR分别扩增抗体重、轻链可变区(VH和VL)基因,经Linker连接形成scFv基因片段.将scFv基因片段与噬菌粒载体pCANTAB 5E的连接产物转化大肠杆菌TG1.用辅助噬菌体M13KO7进行超感染,获得重组噬菌体抗体.选用乳腺癌细胞系MCF-7和人正常肝细胞系HL02做正负差异的筛选细胞,通过5轮筛选,随机挑取克隆,经phage-ELISA筛选特异性结合MCF-7细胞的scFv.结果:构建了1个库容为1.3×106的单链抗体库.筛选到2株与MCF-7细胞有较高结合活性的噬菌体-单链抗体scFv-873和scFv-874.数据库搜索表明这2株单链抗体基因是与以往抗体序列不同的新基因.用Western blot检测了这2株单链抗体在琥珀密码子非抑制型菌株TOP10中的表达情况.结论:筛选到2个与乳腺癌细胞结合特异性较好的单链抗体,为乳腺癌的诊断和治疗研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡宝成	军事医学科学院生物工程研究所	35	154	5.0	11.0
2	袁翔	军事医学科学院生物工程研究所	2	3	1.0	1.0