SYBR GreenⅠ实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测前列腺癌抗原3mRNA表达水平

• 作者: 孙颖浩 杨明 王林辉 许传亮 陈文政 顾正勤
• 来源期刊: 上海医学
• 关键词: 前列腺癌抗原3 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 SYBR Green Ⅰ 前列腺癌
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 176-179
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9934.2006.03.013

摘要

目的采用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,建立检测前列腺癌抗原3(DD3)mRNA的标准,定量检测人体不同组织中该基因的表达水平.方法从LNCaP细胞中采用RT-PCR法扩增特异性DD3基因片段,将其与pMD 18-T载体连接,转化宿主菌JM109,对质粒标准进行聚合酶链反应(PCR)检测及测序.纯化后检测质粒拷贝浓度,制备梯度浓度标准品.应用LightCycler荧光定量PCR仪对标准品进行检测.取正常人乳腺组织、膀胱、结肠、尿道、肺、睾丸、精囊、卵巢、正常前列腺组织、前列腺增生及前列腺癌组织,定量检测DD3 mRNA表达.结果建立稳定的检测DD3 mRNA的标准,正常人乳腺、膀胱、结肠、尿道、肺、睾丸、精囊、卵巢中无DD3 mRNA表达,在正常前列腺及前列腺增生组织中低表达,两者间差异无显著性(P＞0.05);在前列腺癌中高表达(P＜0.05).结论应用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR技术检测DD3 mRNA表达水平简便、可行、经济.DD3基因的表达具有良好的前列腺癌特异性.