NgR特异性siRNA筛选及其表达载体构建

• 作者: 何成 刘百峰 吕碧涛 张涛 徐盛明 袁文
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 质粒 RNA,小分子干扰 核酸类,核苷酸类和核苷类 脊髓损伤
• 年，卷（期）: 2006,（42）
• 所属期刊栏目: 实验神经心理学研究
• 页码范围: 104-106,插图42-2
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 4726字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.42.049

摘要

目的:将siRNA技术应用于NgR,筛选出高效的NgR(Nogo受体)特异性siRNA,并构建其表达载体.方法:2005-03/2006-03,在杭州新瑞佳生物制药有限公司、解放军第二军医大学神经生物教研室设计筛选NgR特异性siRNA,按照E1bashir等设计原则和siRNA的要求,设计、合成4对siRNA,转染体外培养大鼠原代皮层和海马细胞,筛选出基因高沉默效率的NgR特异性siRNA;2004-03/2005-03上海生工生物工程公司将获得的高沉默效率siRNA设计成带有BamH Ⅰ、Hind Ⅲ酶切粘性末端、终止识别序列和LOOP环的发卡式RNA,并将其克隆入载体pRNAT-U6.1/Neo,构建NgR特异性siRNA表达载体,然后进行酶切鉴定及基因测序.结果:①4对NgR特异siRNA中,siRNA199下调NgR mRNA的表达水平效率最高,转染72 h效果最显著(96.04%).NgR特异性siRNA199序列为:5'-CCGAAUCUCUUACGUGCCATT-3'.②将该序列的发卡式RNA成功克隆入载体pRNAT-U6.1/Neo,构建成NgR特异性siRNA199表达载体,酶切鉴定及基因测序表明设计序列完全相符,目的基因序列准确无误.结论:NgR特异性siRNA199及其表达载体构建成功,为进一步合成病毒载体及观察NgR特异性RNA干扰抑制大鼠NgR mRNA表达对脊髓损伤的修复作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	袁文	解放军第二军医大学长征医院骨科	18	98	6.0	9.0
2	何成	解放军第二军医大学神经生物教研室	9	43	5.0	6.0
3	张涛	上海第六医院骨科	2	2	1.0	1.0
4	吕碧涛	解放军第二军医大学长征医院骨科	3	8	2.0	2.0
5	徐盛明	解放军第二军医大学长征医院骨科	4	19	2.0	4.0
6	刘百峰	解放军第二军医大学长征医院骨科	2	13	2.0	2.0