人视网膜色素上皮细胞累积性氧化损伤的机制探讨

• 作者: 刘夫玲 刘成桂 周占宇 牛膺筠 赵颖 黄琰霞
• 来源期刊: 中华眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 色素上皮,眼 过氧化氢 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 507-512
• 页数: 6页
• 分类号: R77
• 字数: 5242字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0412-4081.2006.06.007

摘要

目的探讨累积性氧化损伤对培养的人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelium,RPE)细胞生长的影响及其影响机制.方法体外培养的人RPE细胞中加入600 μmol/L过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2),分别培养1、6、12、24、72 h,采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测不同时段H2O2对人RPE细胞生长的影响,应用荧光素标记的连接素V-碘化丙锭(annexin V-fluorescein isothiocyanate-propidium iodium,Av-FITC-PI)双染色流式细胞法测定人RPE细胞凋亡.采用免疫印迹法检测衰老相关蛋白Clusterin的表达.结果(1)MTT法检测结果:600 μmol/L的H2O2作用6 h,即可抑制人RPE细胞生长,H2O2作用时间延长至24 h,其作用时间与人RPE细胞增长抑制率成正比.(2)Av-FITC-PI法检测结果:600 μmol/L的H2O2作用6 h,可诱导人RPE细胞凋亡,且随时间的延长而增加,差异有统计学意义(P＜0.05);而72 h后则引起细胞的坏死.(3)免疫印迹法检测结果:Clusterin蛋白在正常人RPE细胞呈弱表达,H2O2作用12 h可见Clusterin蛋白表达增强,24 h组表达开始减弱,72 h组仅见微弱表达.结论600μmol/L的H2O2长时间作用可抑制人RPE细胞生长,诱导人RPE细胞凋亡;同时诱导衰老相关蛋白Clusterin的表达;而更长时间的累积损伤则造成人RPE细胞的坏死.H2O2氧化损伤可以模拟人RPE细胞的老年性改变.