亲和柱色谱原位酶切法纯化重金属镉结合的金属硫蛋白-3

• 作者: 华子春 吴芳 杨锋 郑伟娟 陆纯
• 来源期刊: 色谱
• 学科: 化学
• 关键词: 亲和柱色谱 人金属硫蛋白-3 融合表达 Factor Xa原位酶切 纯化
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 279-283
• 页数: 5页
• 分类号: O658
• 字数: 4741字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8713.2006.03.016

摘要

按照人金属硫蛋白-3(hMT-3)的基因序列,选用大肠杆菌偏爱的密码子合成了全长hMT-3基因,并将其插入大肠杆菌融合表达质粒pALEX的多克隆位点中,在谷胱甘肽-硫-转移酶(GST)下游与GST融合表达.通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)LysS中表达了与重金属离子镉结合的融合蛋白GST-Cd2+-hMT-3.经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明融合蛋白主要在超声上清液中.分别通过"先纯化、后酶切"和"亲和柱色谱原位酶切"两种方法纯化了Cd2+-hMT-3,比较了两种方法的纯化效率和得率,表明原位酶切法操作简便,较之"先纯化、后酶切"法减少了洗脱、透析、冻干等步骤,从而也减少了样品的损失,提高了样品的纯度和得率.从摇瓶培养菌液中纯化获得了结合有Cd2+的完整的人金属硫蛋白-3,得率为1.8% .氨基酸组成分析结果表明所获得的Cd2+-hMT-3不含芳香族氨基酸和组氨酸,符合金属硫蛋白的特征;直读电感耦合等离子体发射光谱分析其硫镉原子比为21∶(7.5±0.1),与理论值21∶7基本吻合.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	华子春	南京大学生命科学院医药生物技术国家重点实验室	125	473	11.0	17.0
2	郑伟娟	南京大学生命科学院医药生物技术国家重点实验室	21	108	5.0	9.0
3	杨锋	南京大学生命科学院医药生物技术国家重点实验室	2	12	2.0	2.0
4	吴芳	南京大学生命科学院医药生物技术国家重点实验室	2	4	1.0	2.0
5	陆纯	南京大学生命科学院医药生物技术国家重点实验室	1	4	1.0	1.0