SARS病毒受体ACE2的克隆、原核表达及其功能区鉴定

• 作者: 杨国良 费小战 郭爱珍 陈焕春
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: SARS-CoV ACE2 受体 克隆 表达 功能区
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 118-122
• 页数: 5页
• 分类号: R373|Q78
• 字数: 3686字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2006.02.008

摘要

ACE2(angiotensin-converting enzyme 2, ACE2)是SARS冠状病毒(severe acute respiratory syndrome associated coronavirus, SARS-CoV)的主要受体.此研究旨在鉴定ACE2的SARS-CoV受体功能区,为进一步阐明SARS-CoV与细胞间的相互作用机制及研制抗病毒药物等提供理论依据.利用RT-PCR从Vero-E6细胞的mRNA中分两段扩增ACE2基因,其中N端片段ACE2A1-367(102～1 210nt)不包括ACE2的酶活性位点(1 223～1 237nt, 或374～378aa),而C端片段ACE2B335-805(1 101～2 524nt)包括ACE2的酶活性位点.扩增片段克隆入pMD-18T,并进行测序鉴定.进一步构建与GST基因融合表达的原核表达质粒pGEX-ACE2A与pGEX-ACE2B,IPTG诱导表达.表达的融合蛋白分子量为65kD和77kD,主要以包涵体形式存在.Western blot证实表达产物具有免疫学活性.将纯化的包涵体蛋白质复性后进行Western blot分析,证实pGEX-ACE2A表达的蛋白(～65kD)能与SARS-CoV S1蛋白特异结合,而pGEX- ACE2B表达的蛋白(～77kD)不能与S1蛋白结合.结果表明,ACE2的受体活性与酶活性位点无关,受体功能区在ACE2 N端367个氨基酸内.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈焕春	华中农业大学动物医学院	331	4866	36.0	53.0
5	郭爱珍	华中农业大学动物医学院	86	498	12.0	18.0
9	费小战	华中农业大学动物医学院	2	8	2.0	2.0
10	杨国良	华中农业大学动物医学院	1	4	1.0	1.0