新型雌激素受体β信号通路调节因子的分离及鉴定

• 作者: 丁丽华 叶棋浓 吕秋军 张浩 李杰之 焦园园 王晓辉 袁斌 韩聚强
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 结缔组织生长因子(CTGF) 受体,雌激素 相互作用 GST沉降试验
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 513-516,520
• 页数: 5页
• 分类号: Q579.13
• 字数: 4789字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2006.06.004

摘要

目的:利用酵母双杂交技术筛选与ERβ相互作用的蛋白,为进一步研究ERβ的功能奠定基础.方法:从乳腺cDNA文库中钓取ERβ-AF1 cDNA,构建诱饵蛋白载体pAS2-1-ERβ-AF1,利用酵母双杂交筛选技术,在乳腺cDNA文库中筛选与ERβ-AF1相互作用的蛋白.将含有pACT2-候选基因的酵母菌与含有pAS2-1-ERβ-AF1的酵母菌进行交配实验,利用LacZ报告基因检测ERβ-AF1与候选蛋白之间是否存在相互作用.然后将ERβ-AF1和候选蛋白分别构建到pGEX-KG和pET-28a上,并纯化GST-ERβ-AF1和His-候选蛋白融合蛋白,利用GST沉淀实验进一步验证ERβ-AF1和候选蛋白的体外相互作用.结果:所获取的候选蛋白为CTGF,是CCN 多肽家族成员.交配实验表明,CTGF与ERβ-AF1特异相互作用,而不与空载体或BRCT1对照相互作用.GST沉淀实验进一步验证,CTGF与ERβ、ERα均存在相互作用,但与CTGF同源性较高的NOV蛋白却不与ERβ、ERα结合.结论:CTGF和ERβ存在特异的相互作用.