HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立

• 作者: 徐维明 李健峰 杨柳萌 王云华 王睿睿 郑永唐
• 来源期刊: 中国病毒学
• 学科: 生物学
• 关键词: HIV-1 蛋白酶 表达 纯化 抑制剂
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 126-130
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 4090字
• 语种: 英文

摘要

从HIV-1 ⅢB病毒RNA经RT-PCR得到HIV-1蛋白酶编码序列,克隆到pet28a质粒中构建HIV-1蛋白酶表达载体.阳性克隆转染E.coli BL21 DE3,经IPTG诱导,蛋白酶以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白量的40%.包涵体经Triton X-100洗涤后溶解于8M尿素,溶解后的蛋白溶液经sephacyl s-200 H.R分子筛柱纯化后纯度达到90%以上,收集蛋白酶峰稀释复性并通过超滤进行浓缩.经检测,纯化的蛋白酶具有较高的活性.用荧光标记的蛋白酶底物检测不同浓度indinavir对蛋白酶活性的影响,表明该方法可以用于蛋白酶抑制剂的筛选.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐维明	中国医学科学院医学生物学研究所	7	39	4.0	6.0
2	李健峰	中国医学科学院医学生物学研究所	4	22	2.0	4.0
3	杨柳萌	中国科学院昆明动物研究所分子免疫药理学实验室	12	107	6.0	10.0
4	王睿睿	中国科学院昆明动物研究所分子免疫药理学实验室	8	90	4.0	8.0
8	王云华	中国科学院昆明动物研究所分子免疫药理学实验室	4	14	2.0	3.0