虎源流感病毒HA基因的系统发生分析及其在杆状病毒系统中的表达

• 作者: 侯小强 夏咸柱 王承宇 王铁成 邹啸环 鞠会艳 高玉伟 黄耕
• 来源期刊: 兽类学报
• 学科: 医学
• 关键词: 虎(Panthera tigris) 流感病毒 HA基因 测序 重组杆状病毒
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 123-128
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4320字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1050.2006.02.003

摘要

通过对虎源流感病毒A/Tiger/Harbin/01/2003(H5N1)的HA基因进行克隆与序列测定,证明该基因全长为1731 bp,读码框由1707个碱基组成,编码568个氨基酸.对HA基因的进化分析表明,该基因与H5亚型流感病毒的HA基因同源性最高,其HA裂解位点由6个碱性氨基酸插入序列(RRRKKR)组成,符合高致病性禽流感病毒的分子特征.将HA基因克隆入杆状病毒转座载体质粒pFastBac Ⅰ,构建重组质粒pFastBac-HA;再将该重组质粒转化DH10 Bac感受态细菌,在体内进行重组,并经三重抗性与蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组质粒Bacmid-HA;将Bacmid-HA转染sf9细胞,获得重组杆状病毒.经Western-blotting检测,HA蛋白在重组杆状病毒中获得表达.用感染重组病毒的sf9细胞免疫小鼠,2次免疫后2周可诱导小鼠产生1:8～1:16的血凝抑制抗体,表明虎源流感病毒的HA基因在重组杆状病毒系统中得到了正确表达.