α-synuclein基因过度表达诱导HEK293细胞α-synuclein蛋白病理性积聚

• 作者: 严新翔 唐北沙 廖小平 张如旭 张玉虎 曹立 李静 汤建光 郭纪锋 陈涛
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: α-synuclein基因 蛋白积聚 帕金森病
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 19-22
• 页数: 4页
• 分类号: R394
• 字数: 3882字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1003-9406.2006.01.005

摘要

目的观察α-synuclein过度表达诱导HEK293细胞α-synuclein蛋白病理性积聚的作用. 方法将消除终止密码子α-synuclein基因扩增产物连入pGEM T-easy载体,DNA测序证实后亚克隆入增强型绿色荧光蛋白pEGFP-N1质粒,通过限制性内切酶酶切鉴定重组质粒.采用脂质2000将野生型α-synuclein-EGFP真核表达载体转染HEK293细胞,48 h后采用Axiovert200型倒置荧光显微镜、荧光免疫细胞化学观察其在细胞内的表达,HE染色观察细胞胞浆内嗜酸性小体的形成. 结果消除终止密码子的扩增序列经测序证实并亚克隆入pEGFP-N1质粒后,限制性内切酶酶切鉴定质粒大小、酶切位点上均符合实验设计.将野生型α-synuclein-EGFP真核表达载体转染HEK293细胞,48 h后荧光显微镜下观察细胞在波长488nm蓝色激发光下发出明亮的绿色荧光,其中某些细胞出现绿色荧光物质积聚;免疫荧光细胞化学检测, EGFP阳性细胞同时也表现为a-synuclein免疫反应阳性,某些细胞胞浆内可见α-synuclein免疫阳性产物聚集;HE结果发现一些细胞胞浆内出现圆形的嗜酸性小体形成,约占细胞总数的10.8%.结论野生型α-synuclein基因过表达可诱导α-synuclein蛋白在HEK293细胞内积聚,胞浆内嗜酸性小体形成.