一种获得大片段克隆的SMART全长cDNA 文库构建方法

• 作者: 关荣霞 常汝镇 张宝石 李英慧 董志敏 邱丽娟
• 来源期刊: 大豆科学
• 学科: 农学
• 关键词: 改进的SMART法 扩增后cDNA分级分离 全长cDNA文库 大片段克隆
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 页码范围: 223-227
• 页数: 5页
• 分类号: S5
• 字数: 3433字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-9841.2006.03.004

摘要

针对SMART方法中PCR扩增削减了大片段基因所占比例,使文库中很难获得大片段克隆的问题,进行了方法改进.在原始SMART方法的基础上,以大豆叶片为材料,通过琼脂糖凝胶分级分离技术,将PCR扩增后合成的dscDNA分成3个等级,分别与载体连接、转化,构建相应亚库,每个亚库容量在1.0×106左右,重组率接近99%.改进方法所建文库的平均全长率53.6%,与改进前的(52.2%)相当.插入片段范围为0.5～3.5kb,最大插入片断长度比改进前的提高1.5kb.该方法提高了SMART方法中大片段克隆的获得率,为大豆功能基因组学研究提供了保障.