大黄鱼微卫星标记的富集与筛选

• 作者: 孙效文 梁利群 郝君 鲁翠云
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 大黄鱼 微卫星 磁珠 生物素
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 762-766
• 页数: 5页
• 分类号: Q959.483
• 字数: 2890字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1005-8737.2006.05.011

摘要

根据生物素与链霉亲和素的亲和原理,采用生物素-磁珠富集微卫星,与传统放射性同位素杂交法相结合,构建筛选大黄鱼的微卫星文库.用生物素-微卫星捕捉单链限制性酶切片段(含有接头和大黄鱼微卫星序列),经PCR扩增单链目的片段形成双链,然后连接至T载体上,转化感受态细胞.将移至硝酸纤维素膜的重组菌用32P标记的放射性同位素探针5'[γ-32p]ATP(CA)15筛选出阳性克隆菌.测序结果发现,阳性克隆率为71.9%,105个微卫星位点.其中选取设计合成30对并筛选出22对可用引物.说明所建大黄鱼微卫星文库是一个高质量的文库,可为大黄鱼基因组结构分析、大黄鱼精密微卫星连锁图谱构建、分子进化和系统发育研究、分子标记辅助育种以及经济性状的QTL定位提供大量的微卫星标记.