细胞水平狂犬病病毒感染的RNA干扰

• 作者: 刘晔 卢彦欣 夏咸柱 张守峰 张菲 扈荣良 李忠 李清竹
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 狂犬病病毒 RNAi 感染 糖蛋白 核蛋白
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 462-465
• 页数: 4页
• 分类号: R512.99
• 字数: 3353字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2006.06.010

摘要

以质粒pSilencer2.1-U6 Hygro为基础,设计并构建了针对狂犬病病毒(RV)糖蛋白和核蛋白mRNA的共9个siRNA表达载体,转染BHK-21细胞系后,在潮霉素-B的筛选压力下,获得9个稳定转录相关siRNA的BHK-21细胞株.1000TCID50的RV分别感染24孔板内的上述9株细胞,48h后以直接免疫荧光法检测各株细胞上RV的增殖,结果显示,在经不同siRNA表达载体转染的BHK-21细胞中,RV增殖水平有不同程度下降,RV增殖水平最低者为对照细胞的1%,即RNA干扰效应最高可阻断99%RV的感染.针对其中阻断水平超过90%的靶序列G69和N19,人工合成其双链siRNA,瞬时转染BHK-21细胞后,仍可达到80%以上的感染阻断率.本试验为有效阻断RV早期感染提供了新选择,为通过RNAi研究RV的基因组功能提供了新的依据.