腺相关病毒介导的GDNF对卡那霉素致耳蜗损害的保护性研究

• 作者: 刘玉和 柯肖枚 王成元 肖水芳
• 来源期刊: 中国听力语言康复科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 腺相关病毒 血清型 耳聋 卡那霉素 基因转染/基因治疗
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 14-18
• 页数: 5页
• 分类号: R764.5
• 字数: 4448字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-4933.2006.06.003

摘要

目的 利用腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV),不同血清型对不同宿主细胞转导率存在差异的特点,探讨不同血清型AAV对耳蜗各种细胞尤其是毛细胞的转染率,进一步探讨高转染率的血清型AAV转导神经胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对卡那霉素致鼠耳蜗损害的保护作用.方法 采用不同血清型的AAV携载标记基因绿荧光蛋白EGFP,微注射到鼠耳蜗,荧光显微镜检测耳蜗内EGFP的表达分布和强度.应用筛选出的高转导率的血清型AAV构建携载GDNF的载体,微注射到卡那霉素耳聋模型鼠耳蜗内,经脑干诱发电位检测听力阈值,ELISA法检测耳蜗外淋巴液GDNF蛋白表达,免疫组化检测GDNF蛋白在细胞内的表达,耳蜗毛细胞和螺旋神经节细胞染色检测细胞的凋亡.结果 荧光显微镜结果显示七种AAV血清型转导的EGFP均可分别在耳蜗的不同细胞内表达,其中AAV3-EGFP特异性在耳蜗内毛细胞表达,AAV1-EGFP在耳蜗内毛细胞等高效表达.在卡那霉素耳聋模型鼠中,注射AAV1-GDNF的耳蜗听力阈值比对侧耳低,GDNF在注射耳蜗内的表达水平比对照组高,其在耳蜗内的表达分布与EGFP的表达相似,治疗耳的耳蜗毛细胞和螺旋神经节细胞比对照耳幸存多.结论 作为耳蜗基因治疗的载体,AAV血清型具有高转导率.AAV1型载体转导的GDNF保护了耳蜗功能,可以作为一个有价值的方法预防氨基糖甙类抗生素导致的耳聋.本研究为今后耳蜗毛细胞的进一步研究,以及对由于单基因突变导致的隐性遗传性耳聋开展耳蜗的基因治疗提供依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王成元	卫生部中日友好医院耳鼻咽喉头颈外科	5	22	2.0	4.0
2	肖水芳	北京大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科	78	383	11.0	16.0
3	刘玉和	北京大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科	58	207	6.0	12.0
4	柯肖枚	北京大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科	7	59	2.0	7.0