Aβ-结合性酒精脱氢酶蛋白在缺氧性细胞中的表达及其对细胞缺氧性损害的保护作用

• 作者: Shi Du-yan 吴晓牧 徐红薇 柳喆 王朝东 胡国柱
• 来源期刊: 江西医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Aβ-结合性酒精脱氢酶蛋白 细胞 缺氧,损害 保护作用
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 5-8
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 2486字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2294.2006.06.002

摘要

目的 研究Aβ-结合性酒精脱氢酶蛋白(ABAD)在缺氧性细胞中的表达及其对细胞缺氧性损害的保护作用,以探讨急性缺氧性疾病的治疗新方法.方法 ①观测缺氧状态下细胞Aβ-结合性酒精脱氢酶蛋白表达水平的变化:体外培养的COS-1细胞置于缺氧箱诱导缺氧1～16 h(氧浓度控制1%～2%),收集细胞,裂解,离心得到蛋白提取液,同时用TRIzol方法提取总RNA;Northern blot法检测正常和缺氧状态下细胞ABAD mRNA的表达水平;15 μg总RNA于10%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳分离并转移至尼龙膜,采用QuikHyb快速杂交系统与α-32P标记的全长ABAD cDNA探针杂交,杂交膜于-80℃放射自显影18 h;Western blot检测正常和缺氧状态下细胞ABAD蛋白的表达水平:20 μg蛋白样品于SDS-NuPAGE胶电泳分离,电转移使样品印迹至尼龙膜上,后者依次与鼠抗人ABAD单克隆抗体(一抗)和兔抗鼠抗体(二抗)孵育,用化学发光法显示印迹条带;②观测上调ABAD表达对细胞缺氧性损害的影响:采用逆转录PCR(RT-PCR)方法,扩增ABAD全长编码序列,PCR产物直接克隆至pcDNA3表达质粒中,构建ABAD-pcDNA3表达质粒;将1 μg pcDNA3-ABAD表达质粒DNA用Lipofectmine 2000转染剂转染至COS-1细胞株,培养36 h.正常对照组则以1 μg pcDNA3空载体转染;转染后细胞按上述方法进行缺氧处理,收集细胞,裂解,采用DNA片段化检测试剂盒定量检测ABAD正常表达和高表达条件下缺氧诱导的细胞死亡事件.结果 与正常表达组相比,ABAD mRNA及蛋白水平均于缺氧后1 h开始下降,4～8 h后显著降低,至16 h表达几乎完全消失;提高ABAD的表达可明显降低缺氧所致的DNA片段化水平(P＜0.05).结论 ABAD是缺氧高度敏感性蛋白,同时又是一个对缺氧性损害有明显保护作用的蛋白.因此,它可望成为急性缺血缺氧性疾病临床监测的一个新指标,并具有潜在治疗应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴晓牧	江西省人民医院神经内科	171	1029	15.0	24.0
2	胡国柱	江西省人民医院临床医学研究所	36	159	7.0	10.0
3	徐红薇	哈尔滨医科大学免疫学教研室	15	60	4.0	7.0
4	柳喆	江西省人民医院临床医学研究所	12	83	6.0	9.0
5	王朝东	江西省人民医院神经内科	11	63	5.0	7.0