人胰腺癌 Hedgehog 信号通路中膜蛋白受体 PTCH 的纯化

• 作者: 吴红玉 屠振兴 满小华 许国铭 许爱芳 邵建国 金晶 高军 龚燕芳
• 来源期刊: 胰腺病学
• 学科: 医学
• 关键词: Hedgehog 信号传递 胰腺肿瘤 PTCH基因 pET22b载体
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 141-144
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 3196字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2006.03.004

摘要

目的 构建人胰腺癌PTCH基因表达载体并诱导融合蛋白表达.方法 从人胰腺癌细胞株SW1990抽提总RNA,经RT-PCR扩增出PTCH基因,经纯化、回收目的 基因PTCH,将其插入表达载体pET22b,转化E. Coli BL21-CodonPlus(TM)-RP,构建重组质粒pET22b/PTCH,IPTG诱导表达融合蛋白,免疫印迹进行鉴定,Ni-螯合亲和层析纯化融合蛋白.结果 从人胰腺癌细胞株SW1990克隆出长为789 bp PTCH目的 片段,成功构建重组质粒pET22b/PTCH,并诱导表达目的 蛋白;经Ni-螯合亲和层析得到纯化的融合蛋白.结论 成功构建了重组质粒pET22b/PTCH,并获得纯化的融合蛋白,为进一步研究Hedgehog信号通路在胰腺癌中的发病机制提供了有效工具.