Smac/DIABLO反义寡脱氧核苷酸抑制过氧化氢所致心肌细胞凋亡的实验研究

• 作者: 张丕红 杨兴华 梁鹏飞 肖目张 黄晓元 龙剑虹
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 烧伤 过氧化氢 细胞凋亡 心肌细胞 Smac/DIABLO反义寡脱氧核苷酸
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 烧伤后脏器损害
• 页码范围: 175-179
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3641字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2006.03.005

摘要

目的观察Smac/DIABLO反义寡脱氧核苷酸(asODN)对H2O2引起的大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法将原代培养的新生Wistar大鼠心肌细胞随机分为正常对照组(不行转染)、对照组(单纯用脂质体处理)、错义寡脱氧核苷酸(scrODN)组(转染Smac/DIABLO scrODN)、asODN组(转染Smac/DIABLO asODN)、H2O2组(仅受H2O2刺激)、scrODN+H2O2组(同scrODN组处理后受H2O2刺激)、asODN+H2O2组(同asODN组处理后受H2O2刺激),Smac/DIABLO scrODN或asODN浓度均为4 μmol/L,H2O2为0.5 mmol/L.采用逆转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法观察Smac/DIABLOmRNA和蛋白质表达水平的变化;采用hoechst 33258荧光染色,计算凋亡核百分率;抽提DNA行琼脂糖凝胶电泳,观察是否出现DNA"梯状"条带;采用半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspases)活性检测试剂盒观察caspase-3、caspase-9的活化情况.结果asODN组细胞Smac/DIABLO mRNA的表达明显受抑制,其蛋白质水平较正常对照组下降约80%;对照组、scrODN组、正常对照组此2项指标相近(P＞0.05).正常对照组、scrODN组及asODN组凋亡核百分率低,且caspase-3、caspase-9的活性也处于低表达水平.H2O2组、scrODN+H2O2组凋亡核百分率分别为(52±3)%、(55±5)%,均见典型DNA"梯状"条带,caspase-3、caspase-9活性均明显高于正常对照组(P＜0.01);asODN+H2O2组凋亡核百分率降至(19±5)%,且caspase-3、caspase-9活性明显低于scrODN+H2O2组(P＜0.01),DNA"梯状"条带亦明显减少.结论Smac/DIABLO asODN能抑制H2O2所致大鼠心肌细胞的凋亡.