siRNA对鼠成纤维细胞株中HSP47表达的抑制作用

• 作者: 李琳 王佐林
• 来源期刊: 口腔颌面外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 热休克蛋白47 小干扰RNA,细胞转染
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 199-204
• 页数: 6页
• 分类号: R782|Q78
• 字数: 3704字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4979.2006.03.002

摘要

目的:构建小鼠热休克蛋白47(47 kDa heat shock protein,HSP47)基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)表达载体,及HSP47第一外显子克隆表达载体,观察其在小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞株)中对HSP47基因表达的抑制作用.方法:针对小鼠HSP47的mRNA序列,在368、718位点分别设计两对21nt的,编码HSP47siRNA基因片断的寡核苷酸,退火成双链后将其连接到pSilencer1.0质粒的U6启动子下游,构建pSilencer-HSP47siRNA重组质粒;同时构建HSP47第一外显子重组质粒.经酶切、测序鉴定后,用脂质体介导的基因转染方法,转入MH3T3细胞,用半定量RT-PCR法检测HSP47表达水平的变化.结果:经酶切、测序鉴定,成功构建了siRNA真核表达载体及靶基因克隆表达载体.经脂质体转染NIH3T3细胞后,RT-PCR显示NIH3T3细胞中HSP47基因的mRNA表达水平明显降低,所构建的HSP47-siRNA基因的真核表达载体,成功地抑制了目的基因的表达.结论:构建的小鼠HSP47基因的RNA干扰真核表达载体pSilencer-HSP47siRNA,在NIH3T3细胞中有效地发挥了对HSP47基因表达的干涉作用,从而提示HSP47特异的siRNA具有抑制皮肤瘢痕形成的潜力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李琳	同济大学附属口腔医院口腔颌面外科	46	426	9.0	20.0
2	王佐林	同济大学附属口腔医院口腔颌面外科	51	295	11.0	14.0