水稻高效RNA干涉体系的建立及其功能分析

• 作者: 吴金霞 孙大业 孙学辉 孙颖 宛淑艳 张治国 张芊 彭昊 翟英 路铁刚 郭玉朋
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: RNA干涉 T-DNA 水稻
• 年，卷（期）: 2006,（9）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 1729-1735
• 页数: 7页
• 分类号: S5
• 字数: 6133字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0578-1752.2006.09.001

摘要

[目的] 在水稻中建立高效RNA干涉(RNAi)技术体系.[方法] 构建适合水稻转化的RNAi诱导载体pCADS1341;为检测其有效性,使用它构建针对GUS基因的RNAi载体,并利用基因枪转化法导入GUS基因稳定表达的转基因水稻愈伤组织;为探讨影响水稻中转基因诱导的RNAi效率的因素,针对水稻基因AK121286进行系统的RNAi分析:通过Southern和Northern杂交从T0代RNAi植株中筛选出T-DNA为单拷贝插入,且基因的表达被高效抑制的株系,对来源于该株系的T1代植株进行半定量RT-PCR检测.[结果] GUS染色分析结果表明RNAi诱导元件的瞬时表达可显著抑制GUS基因的表达;RT-PCR结果表明RNAi效应可以遗传给后代,但是不同个体中的RNAi效率存在差异.[结论] RNAi系统的表达量可能是决定RNAi效率的最关键因素;本研究建立的高效RNAi技术体系对于水稻功能基因组学研究具有重要意义.