胰高血糖素样多肽2受体上调表达的Caco2细胞株克隆转染与筛选鉴定

• 作者: 戚华兵 汪仕良 王凤君 王裴 赵云
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 真核细胞 转染 克隆细胞 基因 胰高血糖素样多肽2受体
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 代谢调节及肠黏膜维护
• 页码范围: 258-261
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3832字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2006.04.006

摘要

目的 建立胰高血糖素样多肽2受体(glucagon like peptide-2 receptor,GLP-2R)上调表达的Caco2细胞株,为研究GLP-2肠道保护机制构建体外模型. 方法常规扩增抽提GLP-2R/pcDNA 3.1质粒,经酶切、测序鉴定正确后,用脂质体转染法将其转染至Caco2细胞.G418抗性筛选,挑选耐药细胞克隆培养获得稳定细胞株.以HER293细胞、VE细胞、正常Caco2细胞及正常人小肠组织为对照,采用逆转录聚合酶链反应与蛋白质印迹法检测稳定转染细胞中mRNA及其蛋白的表达. 结果扩增抽提GLP-2R/pcDNA 3.1质粒后经酶切、测序结果正确.GLP-2R mRNA及其蛋白在HER293细胞及VE细胞中无表达,在正常Caco2细胞中表达微弱,在人小肠组织中有较强表达;转染GLP-2R后,Caco2/GLP-2R(+)细胞中GLP-2R mRNA及其蛋白表达明显增强. 结论GLP-2R分布具有相对特异性,正常Caco2细胞中GLP-2R表达较弱;构建的Caco2/GLP-2R(+)细胞模型成立,为深入研究GLP-2的作用机制奠定了良好基础.