小鼠FANCL抗体制备及组织表达谱分析

• 作者: 卢柏松 周煜 朱恒奇 赵庆国 黄培堂
• 来源期刊: 遗传学报
• 学科: 生物学
• 关键词: FANCL 抗体 表达谱
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 动物遗传学
• 页码范围: 49-55
• 页数: 7页
• 分类号: Q95
• 字数: 479字
• 语种: 中文

摘要

FANCL是一个范可尼氏贫血新蛋白,它作为泛素E3连接酶催化FANCD2的单一泛素化,在修复DNA损伤、维持染色体稳定的FA途径中起着关键作用.胚胎期FANCL与小鼠原始生殖细胞增殖密切相关,成年睾丸中FANCL与几个生殖细胞特异性蛋白形成一个睾丸特异网络,可能参与影响精子的生成.采用RT-PCR方法从小鼠总RNA中扩增克隆FancL全长cDNA片段,构建表达质粒,在大肠杆菌中表达了6His-FANCL蛋白,用表达蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备了抗FANCL多抗血清.采用镍离子金属螯合柱纯化6His-FANCL蛋白后,通过与活性基团-NHS交联制备了FANCL抗原柱,亲和纯化了FANCL多抗.为了验证抗体活性和特异性,在HEK 293T细胞中瞬时表达了HA-FANCL融合蛋白,分别用HA单抗和纯化多抗进行Western印迹分析,结果表明获得了特异性的FANCL抗体.为了观察FANCL在组织中的表达谱,制备了多种小鼠组织匀浆蛋白,使用纯化的FANCL多抗进行Western印迹分析,在脑、心、肺、肝、脾、肾、睾丸、卵巢、子宫和肌肉组织中都检测到FANCL蛋白的表达,说明FANCL在小鼠组织中是广泛表达的,这与其是DNA修复复合物中的重要成员相一致.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄培堂		10	72	5.0	8.0
2	赵庆国		2	4	2.0	2.0
3	周煜		1	2	1.0	1.0
4	朱恒奇		2	3	1.0	1.0
5	卢柏松		3	12	2.0	3.0