Tenebrio molitor抗冻蛋白基因家族cDNA片段的克隆、序列分析及原核表达

• 作者: 刘忠渊 吕国栋 张富春 王芸 王贤磊 马纪
• 来源期刊: 遗传
• 学科: 生物学
• 关键词: 黄粉甲虫 抗冻蛋白 cDNA片段 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2006,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1532-1540
• 页数: 9页
• 分类号: Q5
• 字数: 6483字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0253-9772.2006.12.009

摘要

利用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)的方法, 克隆黄粉甲虫(Tenebrio molitor)抗冻蛋白基因cDNA片段并进行序列分析和原核表达.同源性分析表明, 获得9条新cDNA片段, 与黄粉甲虫抗冻蛋白基因家族的其他基因序列具有较高的同源性.重组质粒pGEX-4T-1-tmafp-XJ430, 转化E.coli BL21进行原核表达, SDS-PAGE分析结果表明, 抗冻蛋白基因以可溶性融合蛋白表达, 相对分子量为38 kDa.构建真核表达载体pCDNA3-tmafp-XJ430, 免疫小鼠, 获得的抗血清滴度为1:2 000.Western blotting 结果为单一的条带, 证明该抗血清具有针对抗冻蛋白TmAFP-XJ430抗原的专一性.