海洋低温蛋白酶生产菌YS-9412-130原生质体的制备与再生

• 作者: 孙谧 张琇 李国保 王清印
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 原生质体的制备与再生 低温碱性蛋白酶 YS-9412-130菌
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 106-111
• 页数: 6页
• 分类号: Q932|Q938.8
• 字数: 4437字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1005-8737.2006.01.017

摘要

以海洋低温蛋白酶生产菌株YS-9412-130为研究对象,从传代、菌龄、溶菌酶浓度与酶解时间、甘氨酸与EDTA预处理以及稳定剂对该菌原生质体形成与再生的影响进行研究.结果表明,在相同条件下,第一代菌至第五代菌原生质体的形成率分别为86.9%、70.3%、66.8%、63.4%、60.2%,再生率分别为10.5%、18.6%、17.9%、18.2%、17.8%;取该菌对数生长前期、对数生长中后期、稳定期部分菌液制备原生质体,原生质体的形成率分别为72.1%、70.4%、60.5%,再生率为13.4%、18.9%、10.4%;溶菌酶浓度为2.5 mg/mL、5 mg/mL、10 mg/mL、20 mg/mL,酶解60 min,原生质体的形成率分别为40.6%、70.8%、81.8%、95.6%,原生质体的再生率为19.0%、19.2%、19.0%、10.6%;使用10mg/rmL溶菌酶酶解YS-9412-130菌30 min、60 min、90 min、120 min,原生质体的形成率分别为30.8%、81.3%、81.7%、82.9%,原生质体的再生率分别为19.2%、19.3%、16.9%、11.2%;在细菌培养液中添加终质量浓度为5 mg/mL、10 mg/mL、20mg/mL和40mg/mL的甘氨酸,培养该菌16 h后制备原生质体,原生质体的形成率分别为81.0%、81.1%、90.3%、90.8%、90.6%,再生率为19.1%、19.0%、19.3%、12.0%、9.0%;EDTA对原生质体的形成稍有促进作用,但作用超过30 min会影响原生质体的再生;分别以0.6 mol/L KCl、0.3 mol/L KCl+0.3 mol/L蔗糖、0.6 mol/L蔗糖作为稳定剂,原生质体的再生率分别为10.9%、19.6%、25.9%.结论认为,YS-9412-130原生质体制备的最佳条件为选用第2代YS-9412-130菌,在培养基中添加终质度浓度为10mg/mL的甘氨酸培养16 h后,再将菌体置于含有0.05mol/LEDTA的高渗溶液中30℃预处理30 min,用10 mg/mL溶菌酶,30℃酶解60 min,再用0.6 mol/L蔗糖作为原生质体再生培养稳定剂,比较适合于YS-9412-130原生质体的制备与再生.这一试验结果将为通过原生质体技术对YS-9412-130菌进行遗传改良提供重要参数.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙谧	中国水产科学研究院黄海水产研究所	97	1319	19.0	32.0
2	王清印	中国水产科学研究院黄海水产研究所	118	3069	34.0	50.0
3	张琇	中国水产科学研究院黄海水产研究所	8	97	6.0	8.0
7	李国保	上海水产大学食品学院	2	17	2.0	2.0