弓形虫GRA4基因体外扩增、克隆及在耻垢分枝杆菌中的表达

• 作者: 刘洪波 刘茂铃 吴少庭 张仁利 李俊华 甘燕 翁亚彪 耿艺介 高世同 黄达娜
• 来源期刊: 中国病原生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 GRA4 耻垢分枝杆菌 BCG
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 428-431
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 2669字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-5234.2006.06.009

摘要

目的 体外扩增弓形虫RH株致密颗粒蛋白4(GRA4)基因,构建大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒ps3000-GRA4,重组耻垢分枝杆菌,鉴定重组蛋白的抗原性. 方法 用聚合酶链式反应(PCR)方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA4基因,克隆入pGEM-T载体,然后亚克隆法构建ps3000-GRA4大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒,经电转化方法,将GRA4基因片断的穿梭质粒转化到耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis mc2 155)中,用重组耻垢分枝杆菌免疫小鼠,Western blot方法检测免疫小鼠血清中的弓形虫抗体. 结果 成功扩增了弓形虫的GRA4基因并构建克隆质粒pGEMT-GRA4、穿梭质粒ps3000-GRA4,Western blot分析显示,GRA4重组蛋白能被重组质粒免疫小鼠血清识别,分子质量单位约为40.0 ku. 结论 重组耻垢分枝杆菌在小鼠体内表达出了重组蛋白GRA4,具有抗原性,刺激小鼠机体产生了抗弓形虫的抗体,为弓形虫重组BCG(Bacillus Calmette-Guerin)疫苗的研究奠定了基础.