一种基于适配器连接介导的等位基因特异性扩增法测定多重SNP

• 作者: 倪坤仪 周国华 汪维鹏
• 来源期刊: 遗传
• 学科: 生物学
• 关键词: DNA适配器 SNP 多重PCR CYP2D6
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 219-225
• 页数: 7页
• 分类号: Q75
• 字数: 4013字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0253-9772.2006.02.017

摘要

建立了一种基于DNA适配器连接介导的等位基因特异性扩增法测定多重SNP.以CYP2D6基因中的5个SNP位点(100C＞T,1661G＞C,1758G＞T,2470T＞C和2800C＞T)为例,用PCR法预扩增得一段含所有待测SNP位点的长片段,然后用限制性内切酶将其消化成短片段,在连接酶的作用下与设计的DNA适配器(adapter)相连;该适配器的一端与限制性内切酶降解后留下的粘性末端相同,另一端带有一段公共序列.在两管中加入与适配器连接的片段作为PCR扩增模板,并分别加入SNP特异性引物和一种适配器特异性的通用引物进行PCR扩增,最后用凝胶电泳法分离PCR扩增产物.由于每管与SNP的两种特异性引物中的一种对应,可以根据每管中扩增片段的大小判断SNP的类型.通过凝胶电泳法可以一次分离与5种SNP类型相对应的引物特异性延伸反应产物;采用该法成功测定了20名健康中国人的CYP2D6基因中5个SNP位点的基因多态性,与限制性片段长度多态性法(RFLP)测定结果完全一致.该方法采用n+1种引物(n种SNP特异性引物和一种通用引物)进行n重PCR反应,极大提高了PCR反应的特异性,结果准确,可用于同时测定多个SNP位点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	倪坤仪	中国药科大学分析化学教研室	51	664	14.0	24.0
2	周国华	中国药科大学分析化学教研室	42	681	10.0	25.0
6	汪维鹏	中国药科大学分析化学教研室	6	220	4.0	6.0