小细胞肺癌抗独特型单链抗体的表达及活性研究

• 作者: 张定昌 赵新泰
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 肺肿瘤 癌,小细胞 抗体,抗独特型 基因表达 免疫活性
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 529-532
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 3385字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2006.06.007

摘要

目的:在大肠杆菌中高效表达小细胞肺癌(SCLC)抗独特型抗体3F6单链抗体(ScFv),并获得具有生物学活性的ScFv.方法:从SCLC抗独特型抗体3F6小鼠杂交瘤细胞中提取总RNA,反转录为cDNA.利用小鼠抗体骨架区共用引物,PCR扩增单抗重链可变区(VH)和轻链可变区(VL).通过人工设计的柔性连接肽(Gly4Ser)3连接构建3F6 ScFv.再将其重组到原核表达载体pQE31中,构建3F6 ScFv表达载体.转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达,用Ni-NTA树脂对表达产物进行变性纯化.通过凝胶(Sephacryl S-200)柱上在位复性后,用竞争ELISA检测复性的3F6 ScFy活性.结果:获得了SCLC抗独特型抗体3F6的VH和VL基因,构建了3F6 ScFv表达质粒.在大肠杆菌中高效表达3F6 ScFv,表达蛋白的相对分子质量为32×103,以包涵体形式存在.纯化后获得较纯的3F6 ScFv蛋白,经复性后可竞争2F7抗体与SCLC NIH-H128细胞结合.结论:成功构建、表达、纯化和复性了SCLC抗独特型抗体3F6 ScFv,获得有活性的3F6 ScFv,为SCLC抗独特型抗体的进一步研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵新泰	上海市肿瘤研究所细胞与分子免疫学研究室	21	47	4.0	6.0
2	张定昌	上海市第八人民医院肿瘤科	17	73	5.0	7.0