特异小干扰RNA敲除PLK1基因的表达

• 作者: 丁佳逸 张佳炜 梁巧仪 符芳芳 董庆华 许则丰 郑树 陈功星
• 来源期刊: 遗传
• 学科: 生物学
• 关键词: 小干扰RNA PLK1 基因表达
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 21-25
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3757字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0253-9772.2006.01.005

摘要

为了研究特异小干扰RNA(siRNA)作用于大肠癌细胞株SW480中PLK1(Polo-like kinase 1)基因表达的mRNA对该细胞分裂生长的影响,设计了对应于PLK1基因表达mRNA不同位点的10种特异siRNA,经化学合成后,用脂质体转染SW480细胞,实时定量PCR检测PLK1基因的表达,观察不同的siRNA作用强度,并计数细胞了解相应细胞的生长情况,Western-blot观察PLK1表达蛋白的变化和流式细胞计数分析细胞周期改变.发现10种siRNA均可敲除PLK1基因表达的20%以上,其中P1、P4和P9 3组敲除mRNA达80%以上,这3种siRNA及其混合物对PLK1基因mRNA的作用具有相应浓度效应,在25 nmol/L时达到最佳作用效果,而且相同浓度的混合物作用效果更好(超过95%),PLK1表达蛋白质明显降低,细胞周期在G2期受到阻碍.72 h后的各种siRNA浓度下细胞生长变化与PLK1基因的mRNA水平变化相一致.结果表明化学合成的特异siRNA对SW480细胞中PLK1基因表达具有消除作用,混合物作用更强,在细胞水平上抑制了SW480细胞的分裂生长.