目的:研究低温冻存对骨髓间质干细胞(MSCs)其生物学特性的影响,探讨MSCs理想的保存方法.方法:体外分离培养、扩增正常成人骨髓MSCs,在5%DMSO-30%FBS-DMEM冻存保护剂条件下,分别采用二步法和程控降温冻存方法低温保存3月,以台盼蓝拒染回收率(TBR)、MSCs生长曲线、MSCs表面抗原表达以及其多向分化能力检测,比较两种不同的冻存方法对MSCs生物学特性的影响.结果:程控降温冻存后MSCs活力优于二步法[TBR(87.67±2.52)% vs (79.00±3.61)%,P<0.05].多因素方差分析显示MSCs代数和冻存方法均是影响冻存后MSCs增殖的重要因素.两种冻存方法中P8代细胞的增殖能力明显劣于P1代细胞(P<0.01)或P4代细胞(P<0.01).MSCs程控冻存后增殖能力与冻存前无差异(P<0.05),优于二步法冻存后的增殖能力(P<0.05).程控冻存后MSCs稳定表达CD29、CD44、CD166(与冻存前比较,P>0.05).而二步法冻存后细胞CD29表达下降(与冻存前比较,P<0.05).两种冻存方法对MSCs向成骨细胞、脂肪细胞和神经元细胞分化没有显著影响,与冻存前比较,P>0.05.结论:采用5%DMSO-30%FBS-DMEM冻存保护液和程控降温的冻存体系,可较完整保持MSCs生物学特性,是深低温保存MSCs的理想方案.