摘要:
目的:观察胰岛素对大鼠脑缺血后酪氨酸羟化酶和多巴胺-β-羟化酶表达及学习记忆能力的影响.方法:实验于2001-01/2003-05在解放军第四军医大学完成.①选用纯种健康雄性SD大鼠54只,随机数字表法分为3组:假手术组6只、缺血对照组24只、胰岛素治疗组24只.Y型迷宫箱(张家港生物医学仪器厂制造,MGM-2型).②缺血对照组、胰岛素治疗组采用改良四血管闭塞法建立大鼠全脑缺血模型.假手术组仅暴露双侧翼孔及颈动脉,各血管不行闭塞.③各组大鼠在麻醉状态下钻开颅骨,于前囟后1.2 mm、左旁1.5 mm处用微量加样器进针3.5 mm穿刺脑室.成功后胰岛素治疗组于开放动脉夹行再灌注后立即注入1×105U/L的速效基因合成人胰岛素10 μL,假手术组、缺血对照组注入等量生理盐水.④分别于全脑缺血再灌注1,3,5 d,假手术组(1只/时相点)、缺血对照组(6只/时相点)、胰岛素治疗组(6只/时相点)大鼠断头取脑,行免疫组化染色,光镜下观察海马CA1区神经元酪氨酸羟化酶和多巴胺-β-羟化酶表达的变化.⑤全脑缺血再灌注8周后,用Y型迷宫箱对假手术组(3只)、缺血对照组(6只)、胰岛素治疗组(6只)大鼠的学习记忆能力进行检测,以其测试时达到连续10次中9次正确反应所需的电击次数表示.并计数海马CA1区正常神经元.结果:实验选用纯种健康雄性SD大鼠54只,全部进入结果分析.①全脑缺血再灌注后不同时间点各组脑海马CA1区神经元酪氨酸羟化酶和多巴胺-β-羟化酶的表达:假手术组海马CA1区神经元酪氨酸羟化酶和多巴胺-β-羟化酶呈阴性表达.缺血对照组于缺血再灌注1 d海马CA1区神经元酪氨酸羟化酶和多巴胺-β-羟化酶表达阴性;3,5 d时均呈阳性表达.而胰岛素治疗组于缺血再灌注1,3,5 d海马CA1区神经元酪氨酸羟化酶和多巴胺-β-羟化酶表达均呈阴性.②全脑缺血再灌注8周后各组大鼠学习记忆能力的变化:胰岛素治疗组记忆力损害较轻,达到9/10正确反应所需电击次数明显少于缺血对照组[(9.4±1.8),(18.6±2.7)次,P<0.01].③全脑缺血再灌注8周后各组大鼠脑海马CA1区正常神经元计数结果:假手术组神经元形态正常,细胞核无固缩或溶解,正常神经元计数为(174.6±10.7)个/mm.缺血对照组神经元大部分死亡,正常神经元计数为(10.6±0.6)个/mm.胰岛素治疗组可见部分神经元死亡,死亡神经元胞体缩小或脱失,正常神经元计数为(113.4±9.1)个/mm,明显高于缺血对照组(P<0.01).结论:胰岛素可通过凋节儿茶酚胺合成与分解酶系的活性及含量来影响脑组织中单胺类神经递质的成分,纠正其代谢紊乱,减少神经元的凋亡,减轻脑缺血造成的学习记忆能力损害,从而发挥中枢的直接保护作用.