表达幽门螺杆菌NAP蛋白的减毒沙门疫苗菌株预防幽门螺杆菌感染

• 作者: 朱森林 李国庆 焦志勇 胡品津 陈为 陈旻湖 陈洁
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 Hp-NAP 减毒伤寒沙门菌 疫苗 免疫
• 年，卷（期）: 2006,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 629-632
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3049字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2006.07.009

摘要

目的建立表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)中性粒细胞活化蛋白(Hp-NAP)的减毒沙门疫苗菌,并利用人类幽门螺杆菌感染的小鼠模型研究疫苗菌对Hp感染的免疫保护作用.方法利用分子克隆技术构建携带Hp-NAP基因的重组原核表达质粒pTrc99A-NAP,经PCR及酶切鉴定后测定其基因序列,并与美国国立医学图书馆基因文库中相关序列的同源性进行比较.重组质粒pTrc99A-NAP转化减毒伤寒沙门菌SL3261,培养后筛选阳性菌落,抽提质粒进行PCR及酶切鉴定.表达的Hp-NAP蛋白用SDS-PAGE和West-blotting进行鉴定,用薄层扫描分析蛋白含量.C57BL/6小鼠随机分成4组,分别灌胃给予生理盐水(A组)、减毒鼠伤寒沙门菌SL3261(B组)、携带pTrc99A的SL326组(C组)、携带pTrc99A-NAP的SL326组重(D组).免疫后4周,予Hp攻击,攻击菌量107CFU/只,灌胃2次,每日1次.攻击4周后处死动物,取胃组织分别行改良Giemsa染色及定量细菌培养,观察Hp定植情况.结果核苷酸序列测定及同源性分析证实,克隆的Hp-NAP基因与GenBank中相关序列的同源性为98%(397/402),氨基酸序列的同源性为98%(131/133).pTrc99ANAP转化的减毒沙门菌,可表达Mr约15000的Hp-NAP蛋白,表达量约占菌体蛋白量的37.5%;表达的新生蛋白能与小鼠抗Hp血清特异性反应,具有良好的免疫原性.同空白对照组、SL3261组和SL3261(pTrc99A)组相比,表达Hp-NAP的疫苗株组实验动物的胃组织Hp定植密度明显下降(P＜0.05).结论成功构建表达Hp-NAP的减毒沙门疫苗菌;重组疫苗菌对小鼠Hp感染具有一定免疫预防作用,可作为未来多组分重组减毒沙门疫苗菌的侯选菌株之一.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈洁		104	482	12.0	18.0
2	陈旻湖		191	1602	20.0	28.0
3	胡品津		145	1619	22.0	32.0
4	朱森林		20	79	6.0	8.0
5	陈为		22	258	8.0	15.0
6	焦志勇		8	51	4.0	7.0
7	李国庆		14	71	5.0	8.0