RNA干扰技术抑制人恶性黑素瘤细胞A375中淋巴样增强因子mRNA及蛋白表达

• 作者: 廖文俊 殷河慧 王岩 谢杨新 高天文
• 来源期刊: 中华皮肤科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 黑色素瘤 基因表达 淋巴样增强因子
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 200-203
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 2744字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0412-4030.2006.04.007

摘要

目的利用RNA干扰技术,以淋巴样增强因子(LEF-1)为靶基因,设计、构建重组体,研究其对人恶性黑素瘤细胞A375中LEF-1表达的抑制作用.方法设计、合成针对LEF-1 mRNA序列的有小发夹结构的正义和反义寡核苷酸,退火后与表达载体Psilencer3.1-H1 neo相连接,经鉴定正确后转染人恶性黑素瘤细胞A375,以G418筛选,获得稳定转染细胞株,分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)和免疫细胞化学方法检测转染细胞中LEF-1 mRNA及蛋白表达水平的改变.结果成功构建了靶向人LEF-1基因的siRNA表达载体,获得稳定转染细胞株,转染细胞LEF-1 mRNA及蛋白水平明显下调.结论靶向LEF-1的RNA干扰重组体可抑制人恶性黑素瘤细胞A375中LEF-1表达.