hVEGF165四环素调控腺病毒载体的构建及其在大鼠成肌细胞表达

• 作者: 吴弘 周菲 沈茜 游晓华 秦永文 陈少萍 黄新苗
• 来源期刊: 心脏杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血管内皮生长因子 成肌细胞 重组腺病毒 基因治疗
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 35-38,42
• 页数: 5页
• 分类号: R331.32|Q789
• 字数: 3981字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-7236.2006.01.009

摘要

目的构建表达人血管内皮生长因子165基因(hVEGF165)的四环素调控重组腺病毒,并测定其在原代培养大鼠成肌细胞的表达水平.方法亚克隆hVEGFi65全长cDNA到穿梭质粒pTRE-Shuttle2,获得四环素可调控的目的基因表达盒;亚克隆表达盒到BD Adeno-XTMViral DNA,获得重组腺病毒质粒;重组质粒转染HEK293细胞以包装产生具有感染能力的重组腺病毒颗粒AdTRE.VEGFi65.hVEGFi65重组腺病毒和Tet-off调节病毒共感染原代培养的成肌细胞,酶联免疫法检测目的基因的表达.结果成功构建了能表达hVEGFi65的四环素调控的重组腺病毒载体.hVEGFi65重组腺病毒(20 pfu/cell)和Tet-off调控病毒(20 pfu/cell)共感染骨骼肌成肌细胞后5 d,ELISA检测显示培养上清中VEGF165蛋白浓度显著高于未感染的细胞培养上清[(14.80±1.15 ng/ml)×105/(cell·24 h)vs(1.39±0.36 ng/ml)×l05/(cell·24 h),P＜0.01)].结论四环素调控表达的腺病毒系统可高效地转导VEGF基因进入哺乳动物细胞;原代培养的骨骼肌成肌细胞感染AdTRE.VEGF165后可高水平地分泌VEGF165蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈茜	第二军医大学长海医院实验诊断科	184	1189	17.0	25.0
2	秦永文	第二军医大学长海医院心内科	411	2004	19.0	26.0
3	陈少萍	第二军医大学长海医院心内科	69	332	10.0	14.0
4	吴弘	第二军医大学长海医院心内科	49	289	10.0	15.0
5	游晓华	第二军医大学长海医院心内科	12	32	4.0	5.0
6	黄新苗	第二军医大学长海医院心内科	21	74	6.0	7.0
7	周菲	第二军医大学长海医院心内科	9	36	3.0	6.0