紫杉醇合成途径中紫杉烯合成酶cDNA的克隆

• 作者: 王刚 肖颖 赵冬
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 南方红豆杉 紫杉醇 紫杉烯合成酶 cDNA克隆
• 年，卷（期）: 2006,（10）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 2138-2146
• 页数: 9页
• 分类号: S7
• 字数: 3645字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0578-1752.2006.10.029

摘要

[目的]研究紫杉烯合成酶超表达对紫杉醇代谢的影响,以提高红豆杉属植物细胞中紫杉醇的含量.[方法]从南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)愈伤组织提取总RNA,根据已发表的中国红豆杉紫杉烯合成酶cDNA序列设计两对引物,通过RT-PCR技术扩增出该酶5'端长度为1201 bp和3'端长度为1 388 bp的两个cDNA片段,将其克隆到pGEM-T Vector上并转化到E.coli DH5 α中,5'端片段经Xba Ⅰ和BglⅡ双酶切鉴定,3'端片段经BglⅡ和SacⅠ双酶切鉴定后,对阳性克隆进行序列测定.两片段与双元载体pCAMBIA1300-35S::GUS以T4DNA连接酶连接并转化到E.coli DH5 α中,经Xba Ⅰ和SacⅠ双酶切鉴定.[结果]测序结果证实确为紫杉烯合成酶基因,酶切结果证实紫杉烯合成酶cDNA全长连接成功并插入到pCAMBIA130035S::GUS中.[结论]两cDNA片段拼接得到全长2 589 bp的紫杉烯合成酶基因,编码862个氨基酸,与中国红豆杉紫杉烯合成酶基因具有98%的同源性;成功构建了pCAMBIA1 30035S-TS载体,为下一步的转基因工作做好了准备.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	肖颖	河北师范大学生命科学学院	29	277	11.0	15.0
3	王刚	河北师范大学生命科学学院	31	488	12.0	21.0
6	赵冬	河北师范大学生命科学学院	3	48	3.0	3.0