1型及2型腺相关病毒对视网膜细胞转导效率的比较研究

• 作者: 刘焰 吴小兵 吴继红 张圣海 徐萍 陈霞芳 黄倩
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒科 视网膜 转导效率
• 年，卷（期）: 2006,（40）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2841-2846
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 5340字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2006.40.008

摘要

目的 探讨不同血清型的重组腺相关病毒(rAAV)对视网膜细胞的转导效率、基因表达水平以及感染细胞类型的差异,为眼底病基因治疗选择适当的载体提供实验依据.方法 采用携带绿色荧光蛋白报告基因的血清型1型(rAAV2/1-EGFP)和2型(rAAV2-EGFP)rAAV感染体外培养的RPE细胞株、原代培养的SD大鼠视网膜神经细胞和原代培养的成人RPE细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪观察和检测EGFP荧光出现的时间、阳性率及荧光强度.分别将二种不同血清型的rAAV注射到SD大鼠视网膜下间隙,通过荧光体视镜观察眼底出现EGFP荧光的时间、范围、强度和分布特点等.最后通过眼组织切片和免疫组织化学染色观察被AAV感染的视网膜细胞的类型,以及是否有炎症反应和免疫反应.结果 流式细胞仪检测rAAV2-EGFP转导体外培养的RPE细胞株后第7、14天时EGFP阳性率分别为13.5%±1.7%和15.6%±0.8%,平均亮度为2.75±0.12和3.80±0.72;rAAV2/1-EGFP转导RPE细胞株后第7和14天时EGFP阳性率分别为1.1%±0.5%和2.0%±0.4%,平均亮度为1.12±0.09和1.75±0.20.rAAV2-EGFP感染活体视网膜后7、14、28、75d和4个月时,视网膜内EGFP荧光面积分别为(5389±211)μm2、(9832±364)μm2、(14 454±446)μm2、(20 528±648)μm2和(20 264±683)μm2;rAAV2/1-EGFP感染活体视网膜后在相同时间点测得EGFP荧光面积分别为(9666±348)μm2、(12 160±439)μm2、(19 794±621)μm2、(26 172±923)μm2、(26 022±965)μm2.每相同时间点的两组数据间差异具有统计学意义(均P＜0.05).结论 2型rAAV能有效转导体外培养的视网膜细胞和活体视网膜细胞;但在活体视网膜内1型rAAV是一种比2型AAV更为有效的基因传递载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴小兵	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	24	91	5.0	8.0