小鼠抗人Nanog多克隆抗体的制备及其鉴定

• 作者: 严泉剑 吕扬 吴镝 孙雪峰 师锁柱 洪权 许国双 陈香美
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肾 青春基因 基因免疫 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 413-415
• 页数: 3页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2962字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2006.05.013

摘要

目的用基因免疫方法制备小鼠抗人Nanog多克隆抗体并进行鉴定.方法应用Accelrys软件分析Nanog抗原表位,选择其中免疫原性较强的抗原表位(A16～V101),从Nanog cDNA全长质粒中扩增其cDNA(258bp)序列,克隆到pBQAP-TT构建基因免疫载体,鉴定正确后与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi-Flt3L同时免疫小鼠,12周后用ELISA方法检测血清抗体滴度,Western blot方法鉴定抗体对人肾组织的特异性.同时将Nanog-AAV2病毒转染到HKC细胞,免疫荧光定位Nanog在细胞的表达.结果成功构建了Nanog基因免疫载体,经酶切及序列分析鉴定完全正确.ELISA结果显示抗体滴度为1∶32 000.Western blot结果显示小鼠抗Nanog多克隆抗体识别人肾组织34 kD的Nanog蛋白.免疫荧光结果表明转染的Nanog基因主要表达在HKC细胞细胞核.结论用基因免疫的方法可以成功制备高效价和高特异性抗Nanog多克隆抗体.