家蝇抗菌肽Defensin基因同向串联表达载体的构建和鉴定

• 作者: 刘雷山 朱家勇 王婷婷 金小宝
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 家蝇 抗菌肽 Defensin基因 同向串联 多拷贝
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 3-5
• 页数: 3页
• 分类号: Q963
• 字数: 2508字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2006.02.002

摘要

目的:构建家蝇抗菌肽Defensin基因多拷贝串联体,并克隆到甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K上.方法:PCR法扩增家蝇抗菌肽Defensin基因成熟肽片断,目的片断的上游5'端带有EcoRⅠ和NheⅠ位点,下游5'端带有NotⅠ和XbaⅠ位点,目的片断首先克隆入pMD18-T载体,利用pMD18-T载体的NdeⅠ位点和目的片断上的一对同尾酶(Nhe工和XbaⅠ),多次酶切连接,串联成多拷贝的Defensin成熟肽基因,再用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切,最后克隆入甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K.结果:PCR鉴定、酶切鉴定和DNA测序证明多拷贝基因重组质粒构建成功.结论:该方法能方便高效地获得所需的多拷贝基因,为进一步进行高效表达打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱家勇	广东药学院病原生物学教研室	121	797	13.0	22.0
2	金小宝	广东药学院病原生物学教研室	100	490	12.0	15.0
3	刘雷山	广东药学院病原生物学教研室	9	82	6.0	9.0
4	王婷婷		6	92	5.0	6.0