体外STAT 5诱骗寡核苷酸技术的实验研究

• 作者: 冯文莉 刘兴 史梅 曾建明 涂植光 王小中 陈敏 黄宗干
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 信号转导和转录活化因子5 转录因子 诱骗核苷酸 转染 K562细胞
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 研究生园地
• 页码范围: 355-358
• 页数: 4页
• 分类号: R781
• 字数: 3132字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-764X.2006.05.014

摘要

目的 优化信号转导和转录活化因子5(signal transducers and activators of transcription,STAT 5)诱骗寡核苷酸(decoyoligodeoxynucleotide,decoy ODNs)技术的实验条件,为阻断K562细胞STAT 5信号转导途径,进而诱导细胞表型转变奠定基础.方法 设计并合成STAT 5 decoy ODNs、FAM荧光标记的decoy ODNs和decoy ODNs突变型(M-decoy ODNs);SDS-PAGE检测不同退火缓冲液条件下decoy ODNs双链形成率;倒置荧光显微镜下通过阳性细胞计数比较DEAE、lipofectin和DMRIE-C 3种转染试剂对decoy ODNs的转染效率;流式细胞仪(FCM)检测转染12、24和72 h时FAM-decoy ODNs摄取率和荧光强度,检测decoy ODNs的稳定性;MTT实验检测decoy ODNs对K562细胞活力的影响;RT-PCR检测decoy ODNs对pim-1和c-myc基因表达的影响.结果 退火缓冲液(10 mmol/L Tris,pH 8.0,50 mmol/L NaCl,1 mmol/L EDTA)更有利于decoy ODNs双链形成.DMRIE-C的转染效率(99.2±4.6)%高于DEAE和lipofectin(67.15±7.3)%、(83.2±3.8)%,P＜0.05,并且DMRIE-C介导decoy ODNs转染12、24、72 h的转染效率均＞98%.MTT实验发现DMRIE-C的细胞毒性低,细胞活性为94.23%,decoy ODNs处理组能显著抑制K562细胞MTT还原能力,与其余组相比具有显著性差异(P＜0.05);RT-PCR结果发现decoy ODNs处理组pim-1基因下降了71.20%,c-myc下降了59.46%,与其余组相比有统计学意义(P＜0.05).结论 建立了decoy ODNs最佳的双链形成条件;DMRIE-C能显著增强decoy ODNs转染K562细胞的效率;decoy ODNs能抑制K562细胞活力,抑制STAT 5靶基因的转录.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	涂植光	重庆医科大学医学检验系	172	1533	19.0	32.0
2	陈敏	重庆医科大学医学检验系	46	188	7.0	12.0
3	冯文莉	重庆医科大学医学检验系	94	473	12.0	18.0
4	黄宗干	重庆医科大学临床学院血液科	61	248	9.0	12.0
5	王小中	重庆医科大学医学检验系	10	49	4.0	6.0
6	史梅	重庆医科大学医学检验系	7	26	3.0	4.0
7	曾建明	重庆医科大学医学检验系	9	32	4.0	5.0
8	刘兴	重庆医科大学医学检验系	7	9	2.0	3.0