转染抗VEGF发夹状核酶基因白血病细胞模型的建立

• 作者: 吴朝阳 沈慧玲 许文林 费霞
• 来源期刊: 白血病·淋巴瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 抗VEGF发夹状核酶基因 白血病细胞模型
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 338-340,343
• 页数: 4页
• 分类号: R73-354
• 字数: 3177字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9921.2006.05.006

摘要

目的 建立转染抗血管内皮生长因子(VEGF)发夹状核酶基因的白血病细胞模型,探讨发夹状核酶对白血病细胞系K562 VEGF基因表达的效应.方法 采用脂质体介导的方法将抗VEGF发夹状核酶基因真核表达载体(pcDNA3-RZ)转染入人白血病细胞系K562,G418抗性筛选获得阳性克隆,转染VEGF pcDNA3-RZ和空载体(pcDNA3)的细胞组均有抗性细胞生长,分别命名为K562-RZ和K562-PC;抽提基因组DNA,用PCR方法验证核酶基因已转染入K562细胞,荧光定量PCR和westernblot方法分别检测白血病细胞VEGF mRNA和蛋白的表达量;同时测定K562-RZ,K562-PC和K562三组培养上清刺激内皮细胞生长的情况.结果 抗VEGF pcDNA3-RZ成功转入白血病细胞系K562,G418筛选2周获得阳性克隆,PCR检测证实核酶基因整合入白血病细胞基因组DNA;与K562及K562-PC细胞相比,转染VEGF核酶基因的K562-RZ细胞VEGFmRNA和蛋白的表达量明显降低;K562-RZ组培养上清对内皮细胞的刺激作用明显弱于K562-PC组.结论 建立了转染VEGF发夹状核酶基因的白血病细胞模型,抗VEGF发夹状核酶基因可明显下调白血病细胞VEGF的表达,为抗肿瘤治疗提供了新的线索.