Gcn5基因shRNA的载体构建及其对干细胞分化中组蛋白乙酰化修饰的干扰作用

• 作者: 张小飞 张晓萍 朱静 王应雄 王金菊 田杰
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乙酰化修饰 RNA干扰 质粒 间充质干细胞
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 43-46
• 页数: 4页
• 分类号: R394
• 字数: 3035字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1003-9406.2006.01.010

摘要

目的构建组蛋白乙酰化酶转录辅激活酶Gcn5基因表达的干扰 shRNA质粒并初步检测其性质,为研究干细胞诱导分化过程中乙酰化修饰所起的调控作用奠定基础. 方法选择7条组蛋白乙酰化修饰关键因子Gcn5基因片段,用带有绿色荧光蛋白(green fluorescence protein, GFP)基因的pGenesil-1作为载体,构建相应7个shRNA质粒.脂质体共转染5-氮杂胞苷 (5-azacytidine, 5-aza)诱导的大鼠间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),利用乙酰化酶特异性抗体Gcn5(H75)对转染细胞进行免疫化学检测,荧光显微镜图象分析系统,记数细胞,在同视野中记数转染阳性细胞以及干扰的阳性细胞,初步计算出其转染率和干扰效率.结果通过限制性内切酶酶切和DNA序列分析,重组质粒shRNA与设计相吻合;免疫细胞化学检测,发现转染阴性对照HK的细胞显现"饱满核",乙酰化作用蛋白表达明显;转染shRNA质粒的细胞呈现十分明显表达减弱的"淡染核"或不表达的"空洞核",转染率和干扰效率分别为93.7%和46.6%.结论构建的shRNA质粒能够达到干扰乙酰化作用的目的,为深入研究乙酰化作用奠定了一定的试验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田杰	重庆医科大学儿童医院心血管科	199	1114	15.0	22.0
2	王应雄	重庆医科大学儿童医院公共卫生学院	165	620	13.0	17.0
3	张小飞	重庆医科大学儿童医院心血管科	7	20	2.0	4.0
4	王金菊	重庆医科大学儿童医院心血管科	2	17	2.0	2.0