野生型与Pro370Leu突变型myocilin基因真核细胞表达的对比研究

• 作者: 孙慧敏 季建 李筱荣 王建文 郑建秋
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 青光眼 转染 质粒 基因,MYOC
• 年，卷（期）: 2006,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 690-704
• 页数: 15页
• 分类号: R3
• 字数: 4523字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2006.10.012

摘要

目的比较Pro370Leu突变型myocilin(mMYOC)与野生型myocilin(wMYOC)基因在真核细胞中表达的差别,了解原发性开角型青光眼(POAG)的发病机制.方法将携带有wMYOC基因的绿色荧光蛋白重组表达载体pEGFP-N3-wMYOC和携带有mMYOC基因的红色荧光蛋白重组表达载体pDsRed2-N1-mMYOC,分别及共同转染真核细胞Hela,用荧光显微镜观察蛋白表达定位情况,并用Western 印迹分析蛋白分泌情况.结果荧光显微镜观察到wMYOC蛋白和mMYOC蛋白均成功表达,都定位在细胞质中,但wMYOC蛋白分布均匀,而mMYOC蛋白呈聚集状态.共表达时,wMYOC蛋白也呈聚集状态,且与mMYOC蛋白有共定位倾向.经Western印迹分析,相应的转染细胞可分泌wMYOC蛋白,而不能分泌mMYOC蛋白;当共表达时,也没有wMYOC蛋白分泌.结论两种基因都能成功表达,都定位在细胞质;mMYOC蛋白表现为聚集倾向和分泌障碍,并且影响wMYOC蛋白的表达和分泌特性.