短发夹状RNA干扰对子宫颈癌细胞中Pin1基因表达及细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 卢运萍 周金华 徐茜 朱涛 李红雨 王世宣 白向阳 马丁
• 来源期刊: 中华妇产科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因表达 RNA干扰 宫颈肿瘤 肽基脯氨酰异构酶 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 417-421
• 页数: 5页
• 分类号: R73
• 字数: 4514字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0529-567X.2006.06.015

摘要

目的研究短发夹状RNA(shRNA)干扰对宫颈癌细胞中Pin1基因表达及细胞增殖和凋亡的影响.方法构建靶向Pin1基因的shRNA真核表达质粒pSIREN-Pin1,在脂质体介导下转染人宫颈癌细胞系HeLa细胞(HeLa/p-shRNA组),同时以对照质粒pSIREN-Con(HeLa/p-Con组)和无血清培养基转染HeLa细胞(HeLa组)作为对照,分别应用RT-PCR技术及蛋白印迹法检测Pin1mRNA及蛋白表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和软琼脂细胞克隆实验检测细胞增殖状况,流式细胞仪分析细胞凋亡情况.结果转染后48 h,HeLa/p-shRNA组Pin1 mRNA及蛋白表达水平分别为0.19±0.05和0.33±0.14,HeLa/p-Con组分别为0.84±0.16和0.79±0.17,HeLa组分别为0.89±0.11和0.81±0.15,前组Pin1 mRNA及蛋白表达水平分别与后两组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);转染pSIREN-Pin1质粒后HeLa细胞中Pin1 mRNA及蛋白表达抑制率分别为77％和58％.MTT比色法检测显示,HeLa/p-shRNA组细胞增殖率明显下降(P＜0.05).软琼脂克隆实验显示,HeLa/p-shRNA组细胞克隆小而稀疏,细胞克隆形成率为(12±3)％,明显低于HeLa/p-Con组的(20±5)％和HeLa组的(24±4)％(P＜0.05).流式细胞仪分析显示,HeLa/p-shRNA组细胞凋亡率为(24.3±5.7)％,明显高于HeLa/p-Con组的(5.0±1.4)％和HeLa组的(1.8±0.4)％(P＜0.05).结论shRNA干扰技术能有效抑制靶基因Pin1的表达,进而可抑制宫颈癌细胞增殖并诱导细胞凋亡增加,为宫颈癌的基因研究及治疗提供新思路.