荧光定量PCR检测嗜吞噬细胞无形体

• 作者: 张晶波 朱丽娜 温博海 牛东升 邱玲 陈梅玲
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 嗜吞噬细胞无形体 实时定量PCR gltA基因 埃立克体感染
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 289-293
• 页数: 5页
• 分类号: R376
• 字数: 3706字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2006.04.001

摘要

目的采用新型TaqMan-MGB探针建立检测嗜吞噬细胞无形体的实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR)方法.方法依据gltA基因序列设计嗜吞噬细胞无形体特异引物和探针,以克隆的嗜吞噬细胞无形体gltA基因片段作DNA模板,在荧光定量PCR检测仪(ABI 7900HT)上建立实时荧光定量检测方法.结果建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.996);与套式PCR相比较,荧光定量PCR检测的灵敏度是其100倍.用荧光定量PCR检测其它相关立克次体和细菌DNA样本,检出结果几乎为0;对荧光定量PCR检测重复性进行分析,变异系数(CV)批内和批间误差在0～2.1%之间,证明该荧光定量PCR具有种特异性和良好的重复性.用荧光定量PCR检测体疑染嗜吞噬细胞无形体的10份蜱和30份小鼠脾脏标本,结果与套式PCR检测结果有密切相关性,但是定量PCR检测敏感性和准确率均高于套式PCR.结论本研究建立的检测嗜吞噬细胞无形体的实时荧光定量PCR具有很高的特异性和敏感性,特别适合检出样本中微量嗜吞噬细胞无形体.