大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体的构建及应用

• 作者: 张爱玲 曹要玲 杨明明 白晓婷 龚月生
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 穿梭载体 枯草杆菌 启动子
• 年，卷（期）: 2006,（9）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 8-11
• 页数: 4页
• 分类号: S8
• 字数: 3263字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0529-5130.2006.09.003

摘要

以大肠杆菌pMB1复制类型质粒pUCl8为模板,PCR扩增了700bp的含质粒复制起始点和复制蛋白序列的DNA片段,克隆到质粒pBluskm的多克隆位点,得到含大肠杆菌质粒复制基因的中间载体pE3;以革兰氏阳性菌质粒pGDV1为模板,PCR扩增了含革兰氏阳性菌质粒正负链复制区域的2.5kg片段,并与pE3载体上的大肠杆菌复制子和复制蛋白连接构建了3.2kb的大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pGJ103.电转化pGJ103质粒至枯草杆菌DB104和1A747,均能稳定地复制.以pGJ103为骨架,克隆了不同大小的生物素基因片段,均能正确稳定地复制,证明载体有良好的承载能力.将2kb的热稳定性β-半乳糖苷酶基因(bga)克隆至pGJ103构建了载体启动子检测载体pGJ199.用pGJ199质粒载体作为启动子检测载体,对革兰氏阳性菌启动子片段P59进行了转录活性检测.并以该载体为启动子探测工具,通过鸟枪法得到了大量启动子片段.