基于重组PCR法构建人骨保护素N端的酵母表达载体

• 作者: 张镜宇 戴芳 朱志峰 李晓霞 王宝利 郭刚
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 破骨细胞 成骨细胞 聚合酶链反应 克隆,分子 DNA,重组
• 年，卷（期）: 2006,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 753-755
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2006.11.001

摘要

目的:构建骨保护素(OPG)N端片段的酵母表达载体.方法:OPGN端D1-D4域仅由2个外显子编码.以人基因组DNA为模板,PCR分别扩增外显子2和外显子3,并使外显子2的3'引物和外显子3的5'引物具有相互重叠的一段序列.以2种PCR产物混合物为模板,采用重组PCR扩增OPG N端编码序列,拟插入酵母分泌型表达载体pPIC9K.为使未来分泌表达产物具有完全正确的N末端,再次采用重组PCR策略,将pPIC9K信号肽裂解位点前的一段序列(含单一限制酶位点BamHⅠ)与OPG N端编码序列拼接在一起,从BamHⅠ和EcoRⅠ位点插入pPIC9K.结果:得到了OPG N端酵母表达载体,测序证实插入序列正确.结论:重组载体的获得为基因工程研制具有生物活性的OPG N端片段奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭刚	天津医科大学代谢病医院内分泌研究所	68	454	13.0	17.0
2	张镜宇	天津医科大学代谢病医院内分泌研究所	74	531	13.0	19.0
3	李晓霞	天津医科大学微生物教研室	63	347	8.0	16.0
4	王宝利	天津医科大学代谢病医院内分泌研究所	43	222	9.0	13.0
5	朱志峰	天津医科大学代谢病医院内分泌研究所	5	13	2.0	3.0
6	戴芳	天津医科大学代谢病医院内分泌研究所	2	42	2.0	2.0