可分泌性胰高血糖素样肽1融合蛋白cDNA克隆的构建

• 作者: 刘静华 娄明武 尹学念 庞丽梅 张国斌 王全颖 王绍娟 王继萍 胡卫东
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 胰高血糖素 神经生长因子类 重组融合蛋质类 糖尿病,2型 基因疗法
• 年，卷（期）: 2006,（40）
• 所属期刊栏目: 糖尿病康复相关基础研究
• 页码范围: 75-77
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 3564字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.40.033

摘要

目的:为了探讨体内分泌表达胰高血糖素样肽1(GLP-1)治疗2型糖尿病的可行性,构建可分泌表达胰高血糖素样肽1的cDNA克隆.方法:实验于2005-09/2006-04在西安华广生物工程公司实验室进行.采用非对称互补引物/膜板法,体外合成两端含有酶切位点的胰高血糖素样肽1的cDNA片段,通过用NaeⅠ和XhoⅠ内切酶消化从NT4 cDNA克隆中获取NT4的信号肽和前导序列,通过T4连接酶连接构建分泌表达胰高血糖素样肽1的cDNA克隆.该克隆的特点是确保信号肽酶识别点的正确性.结果:测序证实克隆的胰高血糖素样肽1的cDNA与GeneBank提供的序列完全一致;经限制性内切酶物理图谱方法证实已经成功地将胰高血糖素样肽1 cDNA重组到含NT4的信号肽和前导序列下游.DNAsis软件分析结果表明该克隆编码具有信号肽酶识别点的NT4-GLP-1融合蛋白.结论:成功构建了能够分泌表达胰高血糖素样肽1的融合蛋白的cDNA克隆.