IL-1ra基因修饰角膜内皮细胞及其表达

• 作者: 刘祖国 周世有 王智崇 袁进 陈家祺
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素-1受体拮抗剂 基因转染 角膜内皮细胞
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 2-6
• 页数: 5页
• 分类号: R772.2
• 字数: 5355字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-5141.2006.01.002

摘要

目的构建真核细胞内表达的重组质粒PEGFP-hIL-1ra,对角膜内皮细胞进行基因修饰,为构建白细胞介素-1受体拮抗剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1ra)基因化角膜内皮细胞移植膜奠定基础.方法以人cDNA文库为模板进行PCR扩增,获得人IL-1ra cDNA片断,插入PEGFP-C2载体,构建真核表达质粒PEGFP-hIL-1ra.以阳离子聚合物为介导,对饲细胞培养下的角膜内皮细胞(corneal endothelial cells,CECs)进行体外转染.通过绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)示踪检测转染效率,蛋白免疫印迹检测外源性IL-1ra基因在角膜内皮细胞内表达强度.结果以cDNA文库为模板扩增出hIL-1ra cDNA,通过酶切、DNA测序证实PEGFP-hIL-1ra构建正确.20%～25%的转染角膜内皮细胞中有绿色荧光.Western-blotting检测可见转染角膜内皮细胞内有相对分子量为44 000的hIL-1ra-GFP融合蛋白表达,3 d时蛋白表达水平达到峰值,并且持续至5 d,7 d时表达水平开始回落,9 d时表达处于较低水平,对照组在观察期内均未见蛋白表达.结论阳离子聚合物介导下重组质粒PEGFP-hIL-1ra可对角膜内皮细胞实现有效转染并且持续表达IL-1ra蛋白.