共培养系统中视网膜微血管周细胞经KDR/Flk-1途径对内皮细胞增生的影响

• 作者: 侯旭 张晓光 惠延年 王应利 郭斌 马吉献
• 来源期刊: 国际眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 周细胞 视网膜微血管内皮细胞 共培养 增生 KDR/Flk-1 血管生成 缺氧
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 英文原著
• 页码范围: 255-263
• 页数: 9页
• 分类号: R77
• 字数: 2365字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-5123.2006.02.003

摘要

目的:采用细胞共培养模型研究缺氧诱导视网膜新生血管生成过程中周细胞对微血管内皮细胞增生的作用及其相关血管内皮细胞生长因子受体2(KDR/Flk-1)调节机制.方法:免疫磁珠法原代分离培养大鼠视网膜微血管内皮细胞和周细胞,分别采用抗Ⅷ因子、CD31抗体以及抗血小板源性生长因子受体β、结蛋白抗体免疫细胞化学法鉴定内皮细胞和周细胞.通过Millicell小室建立周细胞和内皮细胞共培养模型,使用MTT法和流式细胞仪检测内皮细胞增殖数量及周期,观察缺氧和常氧下周细胞对血管内皮细胞增生的影响,并采用RT-PCR法检测内皮细胞KDR/Flk-1的mRNA水平变化,探讨相关调节机制.结果:经免疫细胞化学法鉴定,免疫磁珠法可获得高纯度的视网膜微血管内皮细胞和周细胞.MTT法显示,缺氧3～9d内皮细胞增生明显,6d增生达高峰(24.9%,P＜0.01);共培养时内皮细胞的增生可被周细胞抑制.流式细胞仪检测发现,缺氧6d S期内皮细胞数量明显增加(43.9%,P＜0.01);常氧(3.6%,P＜0.05)或缺氧(15.1%,P＜0.01)共培养时,周细胞均可抑制内皮细胞增生.缺氧下内皮细胞KDR/Flk-1的mRNA水平是常氧下的1.3倍;常氧(45.1%,P＜0.05)和缺氧(27.7%,P＜0.05)共培养下,周细胞均可下调内皮细胞KDR/Flk-1的mRNA表达.结论:缺氧和常氧共培养时周细胞均可抑制微血管内皮细胞增生,此抑制作用部分是通过下调内皮细胞KDR/Flk-1 mRNA表达实现.