小檗胺对人慢性粒细胞白血病细胞发生凋亡的诱导机制研究

• 作者: 何智文 古莹 吕庆华 孙建荣 张晓红 徐荣臻 方永明 董庆华 虞瑛姿
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 小檗胺 p210 bcr/abl蛋白 热休克蛋白90 白血病,髓样,慢性 脱噬作用
• 年，卷（期）: 2006,（32）
• 所属期刊栏目: 白血病的基础研究
• 页码范围: 2246-2251
• 页数: 6页
• 分类号: R9
• 字数: 4437字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2006.32.005

摘要

目的 研究新型p210 bcr/abl抑制剂小檗胺诱导人慢性粒细胞白血病细胞凋亡分子的机制.方法 培养表达内源性p210 bcr/abl蛋白的Ph+人慢性粒细胞白血病细胞系K562,用小檗胺按指定时间和剂量干预细胞.应用膜联蛋白荧光素(Annexin-V-Fluos)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)试剂盒和流式细胞术定量分析凋亡细胞百分比;用cytoperm/cytofix和天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白水解酶-3-McAb-PE定量检测含活化天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)细胞百分比;以免疫共沉淀技术(c-abl抗体)和Western印迹[p-Tyr(pY99)抗体]定量分析p210 bcr/abl蛋白磷酸化;p210 bcr/abl蛋白总量直接用Western印迹(c-abl抗体)检测;Hsp90和Hsp70等分子伴侣蛋白水平的变化用Western印迹(Hsp90和Hsp70抗体).结果 48 h IC50浓度小檗胺(8μg/ml)作用48 h后,45.69% K562白血病细胞表达活化的Caspase-3凋亡分子和48.43%白血病细胞发生凋亡.免疫印迹和免疫共沉淀结果显示,低剂量小檗胺可明显抑制白血病细胞内p210 bcr/abl磷酸化:8μg/ml浓度小檗胺处理6 h后,白血病细胞磷酸化p210 bcr/abl蛋白含量仅为对照组的8.41%,而p210 bcr/abl蛋白总量并无变化.小檗胺还能直接下调p210 bcr/abl分子伴侣Hsp90蛋白水平:白血病细胞经8μg/ml浓度小檗胺处理24h时的Hsp90水平只有对照组的18.37%,而且对能诱导白血病细胞产生凋亡抵抗的Hsp70蛋白水平影响不明显.结论 (1)小檗胺是一种新型p210 bcr/abl蛋白磷酸化抑制剂,能通过抑制p210 bcr/abl蛋白磷酸化和诱导Caspase-3通路介导的Ph+白血病细胞发生凋亡;(2)与已知Hsp90抑制剂格尔德霉素(GA)不同,小檗胺能直接下调Hsp90蛋白水平,而对与肿瘤细胞凋亡抵抗有关的Hsp70蛋白表达影响不大,这提示小檗胺可能还是一种新型蛋白分子伴侣Hsp90抑制剂,值得进一步研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕庆华	浙江大学肿瘤研究所	26	294	9.0	16.0
2	董庆华	浙江大学肿瘤研究所	14	124	7.0	10.0
3	方永明	浙江大学肿瘤研究所	14	98	6.0	9.0
4	何智文	浙江大学肿瘤研究所	4	24	3.0	4.0