重组人内皮抑素与血管内皮生长抑制因子融合基因对角膜新生血管内皮细胞的协同作用

• 作者: 柳林 潘欣 王泳
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 基因疗法 角膜新生血管化 内皮抑素类 内皮,血管 生长抑制物 基因融合
• 年，卷（期）: 2006,（33）
• 所属期刊栏目: 组织工程研究
• 页码范围: 85-88
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 6161字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.33.037

摘要

目的:观察内源性血管抑制因子内皮抑素与血管内皮生长抑制因子融合基因对新生血管内皮细胞增殖的协同抑制作用,分析其作用特异性.方法:实验于2002-06/2003-06在解放军第二军医大学微生物实验室完成.常规分子生物学构建携带融合基因内皮抑素-血管内皮生长因子的重组腺病毒,酶切法、聚合酶链反应法鉴定重组腺病毒-内皮抑素-血管内皮生长因子的正确性,半数细胞感染剂量法测定重组腺病毒滴度.以磷酸盐缓冲液、重组腺病毒-β-半乳糖苷酶和重组腺病毒-血管内皮生长因子151为对照组,病毒滴度均为感染复数(MOI)=20,体外感染人静脉内皮细胞ECV304与小鼠成纤维细胞L929 4 h,72 h后应用反转录-聚合酶链反应和Western印迹法分别检测融合基因细胞内的转录及表达情况;于病毒感染后第1,2,3,4,5和7天,结晶紫染色法检测活细胞数,用570/630 nm吸光度(A)值表示,绘制并比较ECV304和L929转基因细胞的生长曲线,观察其作用并分析其作用特异性.结果:①聚合酶链反应法证实成功构建了融合基因重组腺病毒-内皮抑素-血管内皮生长因子,半数细胞感染剂量法测得病毒滴度为2×108 pfu/mL.②各组ECV304细胞结晶紫染色检测结果比较:除感染第1天重组腺病毒-血管内皮生长因子151感染组外(P＞0.05),其余感染各时相重组腺病毒-血管内皮生长因子151感染组、重组腺病毒-β-半乳糖苷酶感染组及磷酸盐缓冲液组ECV304细胞A值均显著高于重组腺病毒-内皮抑素-血管内皮生长因子感染组(P＜0.01).③各组L929细胞结晶紫染色检测结果比较:重组腺病毒-内皮抑素-血管内皮生长因子感染组、重组腺病毒-β-半乳糖苷酶感染组及磷酸盐缓冲液组L929细胞的A值两两比较,差异均无显著性意义(P＞0.05).结论:重组腺病毒-内皮抑素-血管内皮生长因子在体外能有效表达具有生物学活性的融合基因产物,对静脉内皮细胞的增殖具特异性抑制作用,且较单基因产物的抑制作用更强,可用于治疗角膜新生血管的进一步体内实验.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘欣	解放军第二军医大学微生物教研室	3	15	2.0	3.0
2	柳林	解放军第二军医大学长海医院眼科	3	11	2.0	3.0
3	王泳	解放军广州军区广州总医院眼科	1	8	1.0	1.0